Kā darbojas ELISA komplekti

Dubultās antivielu sviestmaižu metode 1. Iepakojums: ar 0,05 MPH9. karbonāta iepakojums ir buferēts, lai atšķaidītu antivielu līdz proteīna saturam no 1 līdz 10 μg/ml. Katras polistirola plāksnes reakcijas atverēs pievienojiet 0,1 ml, 4 °C uz nakti. Nākamajā dienā izmetiet šķīdumu caurumā un mazgājiet to 3 reizes ar mazgāšanas buferi katru reizi 3 minūtes.

(īsumā, mazgāšana, tas pats zemāk). 2. Pievienojiet paraugu: pievienojiet noteiktu pārbaudāmā parauga atšķaidījumu 0,1 ml iepriekš-minētajā iepakoto reakcijas caurumā, inkubējiet 1 stundu 37 °C temperatūrā. Pēc tam nomazgājiet.

(Vienlaikus veiciet tukšo caurumu, negatīvās kontroles caurumu un pozitīvās kontroles atveri). 3. Pievienojiet enzīmu-marķētas antivielas: katrā reakcijas caurumā pievienojiet svaigi atšķaidītu enzīmu-marķētu antivielu (atšķaidīšana pēc titrēšanas) 0,1 ml.

Inkubējiet 0,5 līdz 1 stundu 37 ° C temperatūrā un mazgājiet.

4. Pievienot substrāta šķidruma krāsu displeju: katrā reakcijas caurumā pievienojiet pagaidu preparātu TMB substrāta šķīduma 0,1 ml, 37 grādi C 10 līdz 30 minūtes.

5. Reakcijas beigas: katrā reakcijas caurumā pievienojiet 2M sērskābi 0,05 ml. 6. Rezultāti nosaka: var būt uz balta fona, tieši ar neapbruņotu aci, lai novērotu rezultātus: jo tumšāka krāsa reakcijas caurumā, jo spēcīgāka ir pozitīvā pakāpe, negatīvā reakcija ir bezkrāsaina vai ļoti sekla, atkarībā no krāsas, kas atspoguļojas dziļumā, līdz krāsai, kas atspoguļojas dziļumā,

Skenēta nepāra vērtība: ELISA testerā pie 450 nm (ja BTS krāsu atveide, tad 410 nm) līdz tukšai kontroles cauruma nullei, kas ievadīta, lai izmērītu katra cauruma OD vērtību, ja tā ir lielāka par norādīto negatīvās kontroles OD vērtību 2,1 reizi, tas ir, pozitīva.

Netiešās tiesības

1. Izmantojiet buferējamo iepakojumu, lai atšķaidītu zināmo antigēnu līdz 1 līdz 10 mg/ml katrā caurumā plus 0,1 ml, 4 grādi C uz nakti;

2. Nākamajā dienā mazgā 3 reizes;

3. Pievienojiet noteiktu parauga atšķaidījumu (nezināma antiviela) 0,1 ml iepriekš minētajā-iepakotajā reakcijas caurumā, inkubējiet 1 stundu 37 ° C temperatūrā, mazgājiet;

4. (gan tukšā, gan negatīvā, gan pozitīvā cauruma kontrole) reakcijas caurumā pievienojiet svaigi atšķaidītu enzīma etiķeti otro antivielu (anti-antivielu) 0,1 ml;

5,37 grādi C inkubācija 35-60 minūtes, mazgāšana;

6.'Pēdējā reize, kad mazgājat ar DDW. Atlikušās darbības ir tādas pašas kā "dubulto antivielu sviestmaižu metode" ar 4, 5, 6.